我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pMSCV16URP-U6-sh-HTS6-UbiC-TagRFP-2A-Puro
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 7602 bp
- 载体类型:
- Viral Expression & Packaging Vectors
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Cellecta
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- MSCV
pMSCV16URP-U6-sh-HTS6-UbiC-TagRFP-2A-Puro 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pMSCV16URP-U6-sh-HTS6-UbiC-TagRFP-2A-Puro 载体序列
LOCUS pMSCV16URP-U6-sh 7602 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Lentiviral vector derived from murine embryonic stem cell virus, for
barcoded shRNA libraries, with TagRFP and puromycin resistance
markers.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pMSCV16URP-U6-sh-HTS6-UbiC-TagRFP-2A-Puro
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7602)
AUTHORS Cellecta
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 7602)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7602
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 1..515
/label=MSCV
/note="Murine embryonic stem cell virus promoter including
the enhancer and promoter region of PCMV virus and 5'
untranslated region of dl-587rev retrovirus"
misc_feature 579..920
/label=MESV Psi
/note="packaging signal of murine embryonic stem cell
virus"
CDS 987..1403
/label=gag (truncated)
/note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag
gene lacking the start codon"
promoter 1438..1678
/label=U6 promoter
/note="RNA polymerase III promoter for human U6 snRNA"
misc_feature 1684..1713
/label=cloning site
/note="cloning site"
/note="shRNA cloning site"
promoter 1872..2271
/label=UbC promoter
/note="human ubiquitin C promoter"
CDS 2284..2994
/label=TagRFP
/note="monomeric derivative of red fluorescent protein from
Entacmaea quadricolor (Merzlyak et al., 2007)"
CDS 3001..3054
/codon_start=1
/product="2A peptide from Thosea asigna virus capsid
protein"
/label=2A peptide from Thosea asigna virus capsid
protein
/note="T2A"
/note="Eukaryotic ribosomes fail to insert a peptide bond
between the Gly and Pro residues, yielding separate
polypeptides."
/translation="EGRGSLLTCGDVEENPGP"
CDS 3061..3657
/label=PuroR
/note="puromycin N-acetyltransferase"
LTR 3736..4161
/label=3' LTR (Delta-U3)
/note="self-inactivating 3' long terminal repeat (LTR) from
Moloney murine leukemia virus"
promoter 4427..4756
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin complement(5049..5637)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(5811..6668)
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
promoter complement(6669..6773)
/label=AmpR promoter
LTR 7601..7602
/label=5' LTR
/note="5' long terminal repeat from murine embryonic stem
cell virus"