我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
pRetroX - TetOne is a retroviral vector plasmid. It is designed for conditional gene expression in mammalian cells.
- 载体名称:
- pRetroX-TetOne
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 8508 bp
- 载体类型:
- Viral Expression & Packaging Vectors
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Clontech
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- hPGK
- 感受态:
- Top10
pRetroX-TetOne 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pRetroX-TetOne 载体序列
LOCUS pRetroX-TetOne. 8508 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION All-in-one retroviral vector for strong inducible expression of
genes using the Tet-On(R) system.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pRetroX-TetOne
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8508)
AUTHORS Clontech
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 8508)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8508
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
enhancer 164..543
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
misc_feature 974..1331
/label=MMLV Psi
/note="packaging signal of Moloney murine leukemia virus
(MMLV)"
CDS 1405..1812
/label=gag (truncated)
/note="truncated Moloney murine leukemia virus (MMLV) gag
gene lacking the start codon"
misc_feature 1822..2193
/label=pol region
/note="Moloney murine leukemia virus (MMLV) pol region
containing the splice acceptor site"
polyA_signal 2298..2432
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
misc_feature 2607..2638
/label=MCS
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
promoter complement(2639..3006)
/label=TRE3GS promoter
/note="3rd-generation Tet-responsive promoter that can be
activated by binding of Tet-On(R) 3G, modified to eliminate
binding sites for endogenous mammalian transcription
factors"
promoter 3023..3533
/label=hPGK promoter
/note="human phosphoglycerate kinase 1 promoter"
CDS 3552..4295
/label=Tet-On(R) 3G
/note="modified rtTA protein that binds tightly to
promoters containing the tet operator in the presence of
doxycycline"
misc_feature 4316..4719
/label=WPRE
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
LTR 4880..5092
/label=3'-LTR del in U3
/note="3' LTR (Delta-U3)"
/note="self-inactivating 3' long terminal repeat (LTR) from
Moloney murine leukemia virus"
polyA_signal 5735..5856
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
primer_bind complement(5879..5895)
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 6370..6474
/label=AmpR promoter
CDS 6475..7332
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
rep_origin 7506..8094
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
protein_bind 8382..8403
/label=CAP binding site
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 8418..8448
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 8456..8472
/label=lac operator
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
primer_bind 8480..8496
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"