质粒编号
质粒名称
规格
价格
V010279
pGADT7 AD
5 μg (冻干粉)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供学术研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
Note:
- 载体名称:
- pGADT7 AD
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 7987 bp
- 载体类型:
- Yeast Plasmids
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- Yeast
- 载体来源:
- Clontech
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- ADH1(long)
- 3'引物:
- M13 rev
pGADT7 AD 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pGADT7 AD 载体序列
LOCUS Exported 7987 bp DNA circular SYN 10-SEP-2025
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7987)
AUTHORS 11111111
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7987
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 184..888
/gene="S. cerevisiae ADH1"
/label=ADH1 promoter
/note="promoter for alcohol dehydrogenase 1"
CDS 934..954
/codon_start=1
/product="nuclear localization signal of SV40 large T
antigen"
/label=SV40 NLS
/translation="PKKKRKV"
CDS 970..1311
/codon_start=1
/gene="Saccharomyces cerevisiae GAL4 (truncated)"
/product="activation domain of the GAL4 transcriptional
activator"
/label=GAL4 activation domain
/translation="ANFNQSGNIADSSLSFTFTNSSNGPNLITTQTNSQALSQPIASSN
VHDNFMNNEITASKIDDGNNSKPLSPGWTDQTAYNAFGITTGMFNTTTMDDVYNYLFDD
EDTPPNPKKE"
promoter 1317..1335
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 1354..1380
/codon_start=1
/product="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/label=HA
/translation="YPYDVPDYA"
terminator 1828..2015
/gene="S. cerevisiae ADH1"
/label=ADH1 terminator
/note="transcription terminator for alcohol dehydrogenase
1"
CDS complement(2132..3226)
/codon_start=1
/gene="S. cerevisiae LEU2"
/product="3-isopropylmalate dehydrogenase, required for
leucine biosynthesis"
/label=LEU2
/note="yeast auxotrophic marker"
/translation="MSAPKKIVVLPGDHVGQEITAEAIKVLKAISDVRSNVKFDFENHL
IGGAAIEATGVPLPDEALEASKKADAVLLGAVGGPKWGTGSVRPEQGLLKIRKELQLYA
NLRPCNFASDSLLDLSPIKPQFAKGTDFVVVRELVGGIYFGKRKEDDGDGVAWDSEQYT
VPEVQRITRMAAFMALQHEPPLPIWSLDKANVLASSRLWRKTVEETIKNEFPTLKVQHQ
LIDSAAMILVKNPTHLNGIIITSNMFGDIISDEASVIPGSLGLLPSASLASLPDKNTAF
GLYEPCHGSAPDLPKNKVNPIATILSAAMMLKLSLNLPEEGKAIEDAVKKVLDAGIRTG
DLGGSNSTTEVGDAVAEEVKKILA"
promoter complement(3227..3632)
/gene="S. cerevisiae LEU2"
/label=LEU2 promoter
primer_bind complement(3674..3690)
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 3698..3714
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(3722..3752)
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 3767..3788
/label=CAP binding site
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
protein_bind complement(3843..3876)
/label=loxP
/bound_moiety="Cre recombinase"
/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (GCATACAT)."
protein_bind complement(3954..3987)
/label=loxP
/bound_moiety="Cre recombinase"
/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (GCATACAT)."
rep_origin complement(4227..4815)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4986..5846)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5847..5951)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
rep_origin 6233..7397
/label=2u ori
/note="yeast 2u plasmid origin of replication"