基本信息
- 载体名称:
- pGADT7-Rec
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 8058 bp
- 载体类型:
- Yeast Plasmids
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- Yeast
- 载体来源:
- Clontech
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- ADH1(long)
产品信息
质粒编号:V010277
质粒名称:pGADT7-Rec
规格:5 μg (冻干粉)
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，供学术研究使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pGADT7-Rec 质粒 (编号: V010277)序列
LOCUS pGADT7-Rec. 8058 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION High-copy yeast vector for fusing a cDNA to the GAL4 activation
domain by in vivo recombination.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pGADT7-Rec
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8058)
AUTHORS Clontech
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 8058)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
COMMENT Linearize with SmaI.
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8058
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 771..1475
/label=ADH1 promoter
/note="promoter for alcohol dehydrogenase 1"
CDS 1491..1493
/codon_start=1
/product="start codon"
/label=start codon
/note="ATG"
/translation="M"
CDS 1521..1541
/label=SV40 NLS
/note="nuclear localization signal of SV40 (simian virus
40) large T antigen"
CDS 1557..1898
/label=GAL4 activation domain
/note="activation domain of the GAL4 transcriptional
activator"
promoter 1904..1922
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 1935..1937
/codon_start=1
/product="in vitro start codon"
/label=in vitro start codon
/note="ATG"
/translation="M"
CDS 1941..1967
/label=HA
/note="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
misc_feature 2000..2035
/label=SMART III Oligonucleotide Sequence
/note="SMART III"
/note="matches the SMART III Oligonucleotide for cDNA
synthesis"
misc_feature 2046..2070
/label=CDS III Sequence
/note="CDS III"
/note="matches the CDS III Primer for cDNA synthesis"
terminator 2486..2673
/label=ADH1 terminator
/note="transcription terminator for the S. cerevisiae
alcohol dehydrogenase 1 (ADH1) gene"
CDS complement(2793..3884)
/label=LEU2
/note="3-isopropylmalate dehydrogenase, required for
leucine biosynthesis"
promoter complement(3885..4290)
/label=LEU2 promoter
primer_bind complement(4332..4348)
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind complement(4356..4372)
/label=lac operator
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(4380..4410)
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind complement(4425..4446)
/label=CAP binding site
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
protein_bind 4501..4534
/label=loxP
/note="Cre-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence (ATGTATGC) (Shaw et al., 2021)."
rep_origin complement(4885..5473)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(5647..6504)
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
promoter complement(6505..6609)
/label=AmpR promoter
rep_origin 6891..8055
/label=2u ori
/note="yeast 2u plasmid origin of replication"