质粒编号
质粒名称
规格
价格
V010260
pJG4-5
5 μg (冻干粉)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供学术研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
Note:
- 载体名称:
- pJG4-5
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 6449 bp
- 载体类型:
- Yeast Plasmids
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Gyuris J, Golemis E, Chertkov H, Brent R.
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- GAL1
pJG4-5 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pJG4-5 载体序列
LOCUS pJG4-5. 6449 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Yeast two-hybrid vector with a GAL1 promoter, for fusing the B42
transcriptional activator to a partner protein. Also known as
pB42AD.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pJG4-5
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6449)
AUTHORS Gyuris J, Golemis E, Chertkov H, Brent R.
TITLE Cdi1, a human G1 and S phase protein phosphatase that associates
with Cdk2.
JOURNAL Cell 1993;75:791-803.
PUBMED 8242750
REFERENCE 2 (bases 1 to 6449)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 6449)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Cell";
date: "1993"; volume: "75"; pages: "791-803"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6449
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 81..522
/label=GAL1 promoter
/note="inducible promoter, regulated by Gal4"
CDS 534..536
/codon_start=1
/product="start codon"
/label=start codon
/note="ATG"
/translation="M"
CDS 546..566
/label=SV40 NLS
/note="nuclear localization signal of SV40 (simian virus
40) large T antigen"
CDS 573..809
/label=B42 transcriptional activator
/note="yeast transcriptional activator cretaed from E. coli
genomic DNA fragments (Ma and Ptashne, 1987)"
CDS 816..842
/label=HA
/note="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
misc_feature 849..866
/label=MCS
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
terminator 1004..1191
/label=ADH1 terminator
/note="transcription terminator for the S. cerevisiae
alcohol dehydrogenase 1 (ADH1) gene"
rep_origin 1713..3055
/label=2u ori
/note="yeast 2u plasmid origin of replication"
CDS complement(3419..4090)
/label=TRP1
/note="phosphoribosylanthranilate isomerase, required for
tryptophan biosynthesis"
promoter complement(4091..4192)
/label=TRP1 promoter
promoter 4295..4399
/label=AmpR promoter
CDS 4400..5257
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
rep_origin 5431..6019
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
protein_bind 6307..6328
/label=CAP binding site
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 6343..6373
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 6381..6397
/label=lac operator
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
primer_bind 6405..6421
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"