质粒编号
质粒名称
规格
价格
V010239
pPICZα C
5 μg (冻干粉)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

pPICZα C is a pichia pastoris vector for methanol-inducible intracellular expression of a protein. For other reading frames, use pPICZα B or pPICZα C.

载体名称:
pPICZα C
载体抗性:
Bleomycin
载体长度:
3598 bp
载体类型:
Yeast Plasmids
复制子:
ori
载体来源:
Invitrogen (Life Technologies)
拷贝数:
High copy number
启动子:
AOX1
培养温度:
37℃

pPICZα C 载体图谱

pPICZα C3598 bp6001200180024003000AOX1 promoteralpha-factor secretion signalMyc6xHisAOX1 terminatorTEF1 promoterEM7 promoterBleoRCYC1 terminatorori

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pPICZα C 载体序列

LOCUS       pPICZ-C.        3598 bp DNA     circular SYN 13-SEP-2021
DEFINITION  Pichia pastoris vector for methanol-inducible expression of a 
            secreted protein.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pPICZ-C
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 3598)
  AUTHORS   Invitrogen (Life Technologies)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   2  (bases 1 to 3598)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   3  (bases 1 to 3598)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
COMMENT     SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
COMMENT     Linearize with SacI, PmeI, or BstXI for integration at the AOX1 
            locus.
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..3598
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     promoter        2..940
                     /label=AOX1 promoter
                     /note="inducible promoter, regulated by methanol"
     CDS             941..1207
                     /label=alpha-factor secretion signal
                     /note="N-terminal secretion signal from S. cerevisiae 
                     alpha-factor"
     misc_feature    1207..1281
                     /label=MCS
                     /note="MCS"
                     /note="MCS;multiple cloning site"
     CDS             1280..1309
                     /label=Myc
                     /note="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag"
     CDS             1325..1342
                     /label=6xHis
                     /note="6xHis affinity tag"
     terminator      1422..1668
                     /label=AOX1 terminator
                     /note="transcription terminator for AOX1"
     promoter        1683..2094
                     /label=TEF1 promoter
                     /note="promoter for EF-1-alpha"
     promoter        2102..2149
                     /label=EM7 promoter
                     /note="synthetic bacterial promoter"
     CDS             2168..2539
                     /label=BleoR
                     /note="antibiotic-binding protein"
     terminator      2608..2855
                     /label=CYC1 terminator
                     /note="transcription terminator for CYC1"
     rep_origin      complement(2930..3518)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"