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pYES2 质粒 (编号: V010202)

Note: The pYES2 vector is an episomal high-copy plasmid designed for galactose-inducible protein expression in Saccharomyces cerevisiae.

pYES25860 bp60012001800240030003600420048005400GAL1 promoterT7 promoterMCSCYC1 terminatororiAmpRURA3URA3 promoter2u oriM13 ori
复制序列 NovoBuilder中查看图谱

基本信息

载体名称:
pYES2
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
5860 bp
载体类型:
Yeast Plasmids
复制子:
ori
载体来源:
Invitrogen (Life Technologies)
拷贝数:
High copy number
启动子:
GAL1
感受态:
stbl3
培养温度:
37℃

产品信息

质粒编号:V010202
质粒名称:pYES2
规格:5 μg (冻干粉)

下载资源

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，供学术研究使用。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

参考文献

  • Tsai HC, Hsieh CH, Hsu CW, Hsu YH, Chien LF. Cloning and Organelle Expression of Bamboo Mitochondrial Complex I Subunits Nad1, Nad2, Nad4, and Nad5 in the Yeast Saccharomyces cerevisiae. Int J Mol Sci. 2022 Apr 6;23(7):4054. doi: 10.3390/ijms23074054. PMID: 35409414; PMCID: PMC8999482.

  • Lin CC, Hsieh MH, Teng SC. Genistein suppresses the proliferation of telomerase-negative cells. Food Sci Nutr. 2016 May 26;5(2):197-204. doi: 10.1002/fsn3.382. PMID: 28265354; PMCID: PMC5332266.

  • Piraine REA, Gonçalves VS, Dos Santos Junior AG, Cunha RC, de Albuquerque PMM, Conrad NL, Leite FPL. Expression cassette and plasmid construction for Yeast Surface Display in Saccharomyces cerevisiae. Biotechnol Lett. 2021 Aug;43(8):1649-1657. doi: 10.1007/s10529-021-03142-w. Epub 2021 May 2. PMID: 33934257.

pYES2 质粒 (编号: V010202)序列

LOCUS       Exported                5860 bp DNA     circular SYN 02-SEP-2024
DEFINITION  High-copy episomal vector for galactose-inducible expression of 
            proteins in Saccharomyces cerevisiae.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pYES2
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 5860)
  AUTHORS   Invitrogen (Life Technologies)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   2  (bases 1 to 5860)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   3  (bases 1 to 5860)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
COMMENT     SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5860
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     source          1..5858
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     promoter        2..443
                     /label=GAL1 promoter
                     /note="inducible promoter, regulated by Gal4"
     promoter        475..493
                     /label=T7 promoter
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     misc_feature    501..600
                     /label=MCS
                     /note="MCS"
                     /note="multiple cloning site"
     terminator      609..856
                     /label=CYC1 terminator
                     /note="transcription terminator for CYC1"
     rep_origin      complement(1104..1692)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(1866..2723)
                     /codon_start=1
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     CDS             complement(2822..3622)
                     /label=URA3
                     /note="orotidine-5'-phosphate decarboxylase, required for
                     uracil biosynthesis"
     promoter        complement(3623..3838)
                     /label=URA3 promoter
     rep_origin      complement(4439..5316)
                     /direction=LEFT
                     /label=2u ori
                     /note="yeast 2u plasmid origin of replication"
     rep_origin      complement(5327..5840)
                     /direction=LEFT
                     /label=M13 ori
                     /note="M13 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"