The Gp100 (25-33), human peptide is a 9-amino acid epitope (KVPRNQDWL) derived from the glycoprotein 100 (gp100) melanoma-associated antigen. This peptide is restricted by the MHC class I molecule H-2D^b and serves as a target for cytotoxic T lymphocytes (CTLs). The human version of this peptide exhibits significantly higher binding affinity to H-2D^b compared to its murine counterpart (EGSRNQDWL), due to differences in the three NH₂-terminal amino acids. This enhanced binding results in greater stability of peptide-MHC complexes and more efficient T cell recognition.

Structural analysis reveals that the human Gp100 (25-33) peptide contains optimal anchor residues at positions 5 (N) and 9 (L) for H-2D^b binding. The NH₂-terminal residues (KVP in human vs EGS in mouse) contribute to the differential MHC binding affinity, with the human peptide showing approximately 100-fold greater stabilization of H-2D^b molecules. The core sequence RNQDWL (positions 4-9) represents the TCR contact region, as substitutions in these positions abrogate T cell recognition while modifications in the NH₂-terminal residues maintain immunogenicity.

• Overwijk WW, Tsung A, Irvine KR, Parkhurst MR, Goletz TJ, Tsung K, Carroll MW, Liu C, Moss B, Rosenberg SA, Restifo NP. gp100/pmel 17 is a murine tumor rejection antigen: induction of "self"-reactive, tumoricidal T cells using high-affinity, altered peptide ligand. J Exp Med. 1998 Jul 20;188(2):277-86. doi: 10.1084/jem.188.2.277. PMID: 9670040; PMCID: PMC2212458.

三氟乙酸（Trifluoroacetic acid，简称 TFA）是高效液相色谱（简称 HPLC）纯化过程中常用的反离子。TFA 的存在可能会对肽的净重量、外观及溶解度产生影响，具体如下：

对净重量的影响：TFA 盐会增加产物的总质量。在大多数情况下，肽的含量占总重量的 80% 以上，剩余部分则为 TFA。

对溶解度的影响：TFA 盐通常能提高肽在水溶液中的溶解度。

在生物检测中的影响：对于大多数标准的体外检测，残留的 TFA 水平一般不会造成干扰。但需注意，在高灵敏度的细胞研究或生化研究中，需关注其存在可能带来的影响。

干品多肽的重量中不仅仅包含多肽，还包含有一些非肽的组份，如水、被吸收的溶剂、配位离子和盐等。肽的净含量是指肽在其中的重量百分比，这个百分比的数值范围很大，可能从50%到90%，取决于纯度、序列以及合成和纯化的方法，不要将肽的净含量和肽的纯度混为一谈，他们是两个完全不同的概念。纯度通常是通过HPLC测定的。纯度定义的是多肽样品中含正确序列的组分的百分比，而肽的净含量是指样品中肽类物质相对于总物质所占的百分比，肽的净含量通常是氨基酸组分分析或紫外分光法测定的，这个信息主要是在一些对肽的浓度很敏感的实验中，对计算肽的浓度是很重要的。