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蛋白晶体没有衍射怎么办?

蛋白长出晶体后,有时候会发现没有衍射,可能的原因及应对方法如下:

a. 可能蛋白结构高度灵活,因此结构不均一。可以尝试筛选配体、添加剂、辅因子和其他小分子或者大分子能帮助蛋白呈现更加刚性的构象。

b. 由于蛋白质发生了酶修饰、部分脱氨、部分氧化或者其他翻译后修饰导致样品的非均一性。从蛋白表达、溶解、纯化一直到结晶来分析哪些因素可能会导致您的蛋白样品会发生上述修饰。如果您的蛋白是个酶,那么结合上抑制剂或者配体,可以使得酶变得更加刚性和构象均一。尽量减少从蛋白表达到蛋白结晶的步骤数。

c. 如果晶体在种下去的第二天就长出来了,那么过快的晶体生长可能会导致晶格缺陷。这种情况,要降低晶体生长速度:降低沉淀剂浓度;降低蛋白浓度;在池液表面铺上一层硅油减慢蒸发扩散速度;结晶板池内放更少的池液等。

d. 将晶体装在预冷的毛细管中,然后测试衍射,确认是否是低温造成的衍射很差。如果室温的衍射数据好于低温的,那么可能需要对冷冻方法和程序进行优化。

e. 筛选添加剂


Souce: 纽普生物    2017-05-25