TRIZOL试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIZOL抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+ 选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。并且利用DNA、RNA和蛋白质在不同溶液中的溶解性质，可以通过分层分别将不同层中的RNA（上层）、DNA（中层）、蛋白质（下层）分离纯化出来。本文总结了一些提取中常见的问题。

RNA的提取常见问题

得率低：  

A.样品裂解或匀浆处理不彻底。  

B.RNA沉淀未完全溶解。

A260/A280<1.65：  

A.检测吸光度时，RNA样品没有溶于水，而溶于了TE中。低离子浓度和低pH值条件下A280值偏高。  

B.样品匀浆时加的试剂量太少。  

C.匀浆样品时未在室温放置5分钟。  

D.吸取水相时混入了有机相。  

E.RNA沉淀未完全溶解。

RNA降解：  

A.组织取出后没有马上处理或冷冻。  

B.待提取RNA的样品没有保存于-60至-70℃，而保存在了-5至-20℃。  

C.细胞在用胰酶处理时过度。  

D.溶液或离心管未经RNase去除处理。  

E.电泳时使用的甲醛pH值低于了3.5 。

DNA污染：   

A. 样品匀浆时加的试剂量太少。  

B.样品中含有有机溶剂（如乙醇，DMSO等），强缓冲液或碱性溶液。

蛋白聚糖和多糖污染：  

沉淀RNA的过程中作以下改进可去除这些污染，步骤7中，每使用1ml TRIzol在水相中加0.25ml异丙醇和0.25ml高盐溶液（0.8M柠檬酸钠和1.2MNaCl）混合离心，按之前操作进行。这种方法可使蛋白聚糖和多糖留在溶液中，高效沉淀出纯RNA。从含有大量多糖的植物中提取RNA时应在匀浆后离心，并加上以上操作步骤。

DNA的分离常见问题

得率低：  

A.样品匀浆和裂解的不彻底。  

B.最终得到的DNA沉淀没有完全溶解。

A260/A280<1.70 ：  

A. 检测吸光度时，RNA样品没有溶于水，而溶于了TE中。  

B.酚除去的不彻底，可用0.1M柠檬酸钠（含10%乙醇）再洗一遍DNA沉淀。

DNA降解：  

A.组织取出后没有马上处理或冷冻。  

B.待提取RNA的样品没有保存于-60至-70℃，而保存在了-5至-20℃。  

C.样品匀浆时使用了高速匀浆仪。

RNA污染：  

A.氯仿分层后水相去除的不干净。  

B.DNA沉淀用0.1M柠檬酸钠（含10%乙醇）洗的不彻底。

蛋白质的提取

常见问题分析：

得率低：  

A.样品裂解或匀浆处理不彻底。  

B.最后得到的蛋白质沉淀未完全溶解。

蛋白质降解：

组织取出后没有马上处理或冷冻。

电泳时条带变形：

蛋白质沉淀洗涤不充分。

2016-05-11