纽普生物

抑制T细胞增殖的抗CD45单克隆抗体的制备

目的 寻找能调节T细胞功能的相关分子,进行与T细胞介导的自身免疫性疾病相关的研究。方法从BALB/c小鼠骨髓中收集树突状细胞,免疫Wistar大鼠,进行细胞融合,建立杂交瘤细胞系。筛选得到很多株能调节T细胞功能的杂交瘤细胞系,对其中一株最能抑制T细胞增殖的杂交瘤细胞系进行了进一步的深入研究。结果 显示其目标分子是CD45,同时增殖实验结果显示该抗体能显著抑制T细胞增殖反应。结论 抗CD45单克隆抗体能有效抑制T细胞增殖,有望将本抗体用于T细胞介导的自身免疫性疾病的相关预防及治疗中。

CD45,又可称之为B220、CD45R、CD45RA、CD45RB、CD45RC、EC3. 1. 3. 48、LCA、T200、Ly5 和PTPRC。Trowbridge 等研究表明CD45 CD45RO 是白细胞表面共同抗原( leukocyte common antigen,LCA) ,在所有白细胞上都有表达,并且已经证实在各种不同的哺乳动物,鸡、鲨鱼及红鳍东方豚中,都有CD45 同系物存在。CD45 是一种表达在所有有核造血细胞及其前体表面均有表达的I 型转膜分子。Fellberg 等研究证实,CD45 参与多种免疫功能,尤其对细胞信号转导、淋巴细胞生长、发育和活化具有重要的调节作用。Johnson 等研究证实,CD45 是细胞膜上信号传导的关键分子,在淋巴细胞的发育成熟,功能调节及信号传递中具有重要意义。但CD45 是否在T 细胞增殖过程中发挥作用,迄今未见相关报道。
我们使用来源于BALB /c 小鼠骨髓的树突状细胞对大鼠进行免疫,然后得到许多可以识别T 细胞或树突状细胞的杂交瘤细胞,其中一株杂交瘤细胞分泌的抗体对CD4 + 和CD8 + T 细胞增殖有最强的抑制作用。对其进行的更进一步的分析,表明该杂交瘤所分泌的抗体的目标分子是CD45。T 细胞的异常增殖在自身免疫性疾病如1 型糖尿病、类风湿性关节炎等的发生发展中起着重要的作用。基于此,有必要深入研究抗CD45单克隆抗体是否能预防治疗一些与T 细胞异常增殖诱导的相关疾病。

讨论
CD45,又可称之为B220、CD45R、CD45RA、CD45RB、CD45RC、CD45RO、EC3. 1. 3. 48、LCA、T200、Ly5 和PTPRC。是白细胞表面共同抗原( leukocyte common antigen,LCA) ,在所有白细胞上都有表达,并且已经证实在各种不同的哺乳动物、鸡、鲨鱼及红鳍东方豚中,都有CD45 同系物存在。Thomas等的研究表明CD45 是一种在所有有核造血细胞及其前体表面均有表达的I 型转膜分子。Trowbridge等研究证实,在各种不同的哺乳动物、鸡、鲨鱼及红鳍东方豚中,都有CD45 同系物存在。还有研究表明,在T 细胞及B 细胞中,多达10% 的细胞表面区域由CD45 组成。CD45 参与多种免疫功能,尤其对细胞信号转导、淋巴细胞生长、发育和活化具有重要的调节作用。Byth 等在应用CD45突变细胞系和CD45 缺陷小鼠所做的实验中证实,在淋巴细胞活化所必需的T 细胞抗原受体( TCR)和B 细胞抗原受体( BCR) 所介导的信号通路中,CD45 起着关键的正调节作用。CD45 由一类结构相似,分子量较大的跨膜蛋白组成,广泛存在于白细胞表面,是细胞膜上信号传导的关键分子,在淋巴细胞的发育成熟,功能调节及信号传递中具有重要意义。Western blot 和免疫共沉淀结果表明,我们所构建的单克隆抗体,目标带位于约250 × 103 处。同时,细胞增殖实验表明,抗CD45 单克隆抗体能有效抑制CD4 + 和CD8 + T 细胞增殖,提示CD45 在T 细胞的增殖过程中发挥关键作用,但CD45 究竟以何种方式经何种途径对T 细胞的增殖发挥有效抑制作用仍需进行进一步的研究予以阐明。
很多实验结果证实,以T 细胞介导为主的自身免疫性疾病中,如自身免疫性甲状腺病,类风湿性关节炎等,自身反应性T 细胞直接参与其中,作为效应细胞识别和攻击带有特异自身抗原的靶细胞所引发。T 细胞表面表达有大量的共刺激分子,如CD3、CD98 等,对T 细胞的增殖、功能分化及存活起着正调或负调作用。大量的研究证实对这些共刺激分子的作用进行修饰可以有效的调节T细胞功能,并且研究人员已经从这些实验研究中开发出大量的试剂,比如以共刺激分子受体或配基为作用目标的单克隆抗体或者重组的可溶性配基,用于T 细胞介导的自身免疫性疾病的治疗。
本文所构建的抗CD45 单克隆抗体,能有效地抑制CD4 + 和CD8 + T 细胞增殖,我们将对其进行更深入的研究,探索其对T 细胞介导的自身免疫性疾病的预防和治疗作用,为将来的临床应用打下坚实
的基础。


原文链接: http:/www.novoprolabs.com/support/articles/201410311130.html

(by admin)

2014-10-31