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多肽保存和溶解指南

一.多肽的保存

多肽保存指南:冻干粉形式的多肽,经密封包装可在常温条件下稳定运输,溶解状态的多肽不宜长期保存。

需要长期保存的多肽,应以冻干粉形式存放在含有干燥剂的密封容器内,置于-20°C保存,-80°C效果更好,可以最大限度地避免多肽降解,避免了被细菌降解和氧化,也可以避免二级结构的形成。大多数肽用这种储存方式可以使多肽保存半年以上,稳定性差一些的多肽一般也可以保存3个月以上。

打开包装: 在打开包装和称重前,请先将多肽在干燥器中平衡至室温。因多肽往往具有吸湿性,未经平衡到室温的多肽在打开盖子后易凝结,从而降低了多肽产品的稳定性。

称重: 迅速称取您所需的多肽,并将剩余多肽继续储存在-20°C或更低温度。当无法冷冻干燥时,最好的方法是分装成较小的样量存放,分批次取用,并尽快使用。

其他:含Met,Cys,Trp,Gln或Asn的多肽容易降解,所以相对于其他不含此类氨基酸的多肽,其保存期较短,尤其是N末端为Gln,建议尽快使用。

二.多肽的溶解

溶解肽是一个很重要的环节。如果溶解不当可能导致肽损失或者实验失败。肽的溶解性主要取决于肽的序列,所以,设计多肽时要加注意,肽序列中建议应包含20%的带电残基以增加其溶解度。   

在使用之前,客户可以遵循以下三个基本原则来选择合适的溶剂溶解多肽。

首先,所选溶剂一定能充分溶解多肽;其次,所选溶剂能与实验条件兼容;最后,所选溶剂不能与肽反应,也不能使肽降解。

只要肽的量允许,可以先用少部分肽溶解,然后再将全部样品溶解。如果需要从溶剂中回收肽,可以选择 一种初始溶剂使其在冻干后容易去除。   

以下建议或许对您溶解肽有所帮助:   

1. 少于5个氨基酸的肽一般溶于水溶液,强疏水的氨基酸(W,I,L,F,M,V,Y)除外。   

2. 如果带电氨基酸平均分布于全部序列中,那么含有>25%带电氨基酸(E,D,K,R,H)的亲水肽和含有<25%疏水氨基酸的肽一般都能溶于水溶液。多肽的纯化系统一般为0.1%TFA/水和0.1%TFA/ ACN。因此,如果肽溶解在没有缓冲能力或者缓冲能力很弱的缓冲液中,结果可能导致肽溶液呈酸性。在使用别的方法溶解肽时务必使溶剂的pH值近乎中性。酸性肽(E+D残基数多于K+R+H残基 数)和碱性肽(K+R+H残基数多于E+D残基数)在中性pH值条件下比在酸性pH值下更易于溶解。  

3. 对于疏水氨基酸含量为50%~75%的肽,即使序列中含有>25%带电氨基酸也有可能不溶于水或者部分溶解。最好先把肽溶于最少量的强有机溶剂如DMF、ACN、异丙醇、乙醇、乙酸、4-8M GdnHCl、 尿素,或者DMSO(序列中没有C,W,M时),及其它类似的有机溶剂中。最好将溶解肽的有机溶 剂缓慢地逐滴加入水溶液中,如果溶液变浑浊,可能是达到了溶解极限,继续溶解就没什么用了。 需要注意的是,最开始选择的溶剂应该与实验系统兼容。   

4. 疏水氨基酸含量>75%的强疏水肽一般也不溶于水溶液。此类肽也应该先用强有机溶剂(如TFA,甲酸)溶解,如果将其加入到水溶液中也可能产生沉淀。最后的肽溶液可能需要高浓度的有机溶剂使之变性,而有机溶剂一般不用于活细胞的生物功能研究。   

5. S,T,E,D,K,R,H,N,Q,Y含量高(>75%)的多肽序列容易形成多余的分子间氢键网络, 在浓的水溶液中容易形成凝胶。此类肽可以用步骤3所述方法溶解。为了减少溶解中可能出现的问题,建议客户从设计上和序列上多加考虑,以改善肽的溶解度。

Souce: 纽普生物    2019-01-18