纽普生物

常用蛋白标签、序列及特性总结

常见表位标签和序列

标签

蛋白质序列

FLAG

DYKDDDDK

3 x FLAG

DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDK

HA

YPYDVPDYA

His

HHHHHH

HSV

QPELAPEDPED

Myc

EQKLISEEDL

V5

GKPIPNPLLGLDST

Xpress

DLDDDDK或DLYDDDDK

Thrombin

LVPRGS

BAD(生物素受体域)

GLNDIFEAQKIEWHE

Factor Xa

IEGR或IDGR

VSVG

YTDIEMNRLGK

SV40 NLS

PKKKRKV或PKKKRKVG

Protein C

EDQVDPRLIDGK

S标签

KETAAAKFERQHMDS

OneStrap

SAWSHPQFEK2GGSAWSHPQFEK

SB1

PRPSNKRLQQ

常用表位标签的生物化学特性总结如下:

氯霉素乙酰转移酶(CAT)

这个24kDa大小的标签也用作报道基因,与大多数蛋白质融合时依然能保留其活性。这意味着它可以用来直接测量表达水平,而不需要PAGE或免疫检测。

二氢叶酸还原酶(DHFR)

这个25kDa蛋白质参与胸苷生物合成途径。带有这个标签的蛋白质的纯化可以通过甲氨蝶呤连接的树脂实现。

FLAG

带电的八肽序列(DYKDDDDK),可用于蛋白检测,特别是在串联为3xFLAG™表位(DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDK)时。这有助于研究低丰度蛋白质和优化难以表达的蛋白质项目。它也是一个很好的纯化标签。FLAG序列还含有肠激酶切割位点,如果标签位于N端,切除后不留多余的残基。

谷胱甘肽S-转移酶(GST)

GST是最早被使用的表位标签之一; 它可以置于N或C端并可以蛋白质的可溶表达。用谷胱甘肽结合树脂进行纯化。

绿色荧光蛋白(GFP)

在表位标签中独一无二,GFP是一种自发荧光的27 kDa标签,可通过荧光显微镜直接在活细胞中检测到。

血凝素A(HA)

HA来自流感血凝素蛋白的结合结构域,含有高比例的带电残基(YPYDVPDYA),因此可能形成强烈的抗体识别位点。

组氨酸(His)

这是目前使用最广泛的纯化标签; 它允许用镍亲和树脂进行纯化。这些树脂可耐受变性条件(可用于从包涵体中纯化变性溶解的蛋白质)并可重复使用。结合特异性低于抗体树脂,因此通常需要额外的纯化步骤。酸性洗脱已被用作咪唑的低盐替代物,钴可用于代替镍以提高特异性。金属蛋白和富含组氨酸的蛋白质(例如氯霉素乙酰转移酶)也与这些树脂结合,所以建议使用合适的对照。

单纯疱疹病毒(HSV)

HSV来源于糖蛋白D前体包膜蛋白并且短(QPELAPEDPED),所以它不太可能干扰蛋白质结构或功能。

荧光素酶

常用于检测蛋白表达的报道基因。可以通过免疫学方法验证结果。

麦芽糖结合蛋白(MBP)

该标签的大小(43kDa)有助于其增加大肠杆菌中可溶性蛋白质的产量。与GST和硫氧还蛋白一起,它作为促溶标签也十分受欢迎。使用低成本的直链淀粉树脂(标签和蛋白质之间的Asn10 spacer能增强与树脂的结合能力)实现纯化。

c-Myc

c-Myc(或myc)已广泛用于免疫印迹,免疫沉淀和流式细胞术。它的小尺寸(EQKLISEEDL)意味着它不太可能干扰(或增强)蛋白质折叠,可置于蛋白质的N端和C端。

Protein A和protein G

这些细菌超抗原可以与IgG结合。可以将它们与蛋白质融合以使用IgG进行纯化,但它们通常用于抗体检测和抗体纯化。

链霉亲和素/生物素

链霉亲和素 - 生物素相互作用的亲和力(10-14 M)意味着它可以承受苛刻的条件,所以它常用来固定蛋白质(例如在蛋白质芯片的生产中)。链霉抗生物素蛋白可以以全长,截短或突变的形式与目标蛋白融合。

T7

这是来自T7噬菌体的基因10产物的260个残基的标签; 可增强大肠杆菌中的表达水平。

硫氧还蛋白

尽管其尺寸很小(11kDa),但硫氧还蛋白作为促溶标签非常有效(与所有增溶标签一样,溶解度不一定意味着功能性折叠,并且融合蛋白可能在其标签被切割时发生沉淀)。硫氧还蛋白有个独特的性质,就是耐高温,在高达80°C的温度下稳定,并且可以赋予其融合伴侣一定的热稳定性。这样,细胞蛋白可以经热变性处理而不影响融合蛋白。纯化可以使用苯基胂氧化物树脂或抗体共轭树脂来实现。

V5

来源于副粘病毒SV5的P / V蛋白的95-108位氨基酸(GKPIPNPLLGLDST)。

水泡性口炎病毒糖蛋白(VSV-G)

VSV-G

氨基酸序列为(YTDIEMNRLGK)。

酵母双杂交标签:B42,GAL4,LexA,VP16

这些标签用于酵母双杂交系统中的蛋白质相互作用,可作为DNA结合(GAL4,LexA)结构域; 转录激活因子(B42,GAL4,VP16)

Souce: 纽普生物    2018-03-28